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ELISA試劑盒研發(fā)功用研討
更新時間:2017-01-11   點擊次數:1436次

ELISA試劑盒在優(yōu)化免疫學反響條件后,建立了克百威直接競賽ELISA法和直接競賽ELISA法,檢查限分別為0.005mg/L和0.01mg/L,檢查線性范圍分別為0.005~10mg/L和0.01~10mg/L,并在此根底上研發(fā)了兩種用于檢查水、泥土、蔬菜、中毒樣品的酶聯免疫試劑盒,其ELISA試劑盒的重現性好,批內批間及整體變異系數均低于8.0%,試劑盒檢查的正確度高, ELISA試劑盒除嘔吐物樣品外,其余樣品的回收率均在89.62%以上。
本研究ELISA試劑盒以2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃氯甲酸酯為根底組成了克百威的兩種半抗原,6—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]已酸(BFNH)和4—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)。 用組成的克百威免疫原免疫兔子后取得價、高特異性的抗克百威多克隆抗血清,用直接ELISA測定效價為1:16000~1:128000,純化抗體效價為1:500000~1:4000000。并選擇由BFNB-BSA免疫兔子所得的一種純化抗體與辣根過氧化物酶偶聯制備成酶標抗體,一起了測定了酶標抗體的活性,效價為1:4000。所得克百威多抗血清與丁硫克百威的穿插反響率6.19%,與呋喃酚的穿插反響率為4.00%,與供試的其它5種氨基甲酸酯類的穿插反響率均小于0.44%,對于三種有機磷的穿插反響率均低于0.12%。  
ELISA試劑盒一起,依據抗體抗原的特異性反響的原理,進一步研究了抗克百威抗體對小鼠克百威中毒后的解毒效果,實驗結果表明,抗體能夠較好地減輕克百威對乙酰膽堿酯酶克制效果的表現,使中毒小鼠逐步恢復正常。一起將這兩種半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯組成克百威免疫原和包被抗原,并用紫外光譜法測定克百威與載體蛋白物比。

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