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細胞系培養(yǎng)技術(shù)是細胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù)，通過細胞培養(yǎng)既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。

想成功培養(yǎng)出細胞系得出想要的結(jié)果，要注意以下事項：

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1、從液氮罐中拿出凍存管時要做好防護工作，特別是避免液氮濺到眼睛里，有條件的實驗室可以配備防凍手套和護目鏡；

2、取出的凍存管要先確認管內(nèi)沒有液氮，再放入37度水浴鍋，有液氮的情況下很容易因為管內(nèi)壓強突然增大而導(dǎo)致凍存管炸裂，輕則細胞無法使用，重則傷及實驗人員；

3、融化過程中要不斷輕輕搖晃凍存管，使其盡快融化，但搖晃程度要把握得當(dāng)，不能讓水浴鍋中的水滲進凍存管中；

4、離心的具體轉(zhuǎn)速和時間視細胞而定，通常難養(yǎng)的細胞需要降低轉(zhuǎn)速，縮短時間，以減少離心對細胞的傷害；

5、部分對離心敏感的細胞（主要是原代細胞）可以采用融化后不離心，直接重懸后補足培養(yǎng)基培養(yǎng)，待其貼壁后再換液去掉凍存液中DMSO的方式處理；

第六、如果凍存細胞量不多，可以在凍存管蓋上標(biāo)注離心方向，以便確定離心后細胞團位置，吸去上清時調(diào)整凍存管角度，使細胞團位于最下方，可以盡量減少細胞損失。

細胞污染的預(yù)防

1 實驗用品防止污染。細胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、各種溶液滅菌要仔細，并在無菌實驗檢測陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。

2 操作過程防止污染。

3 穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進入細胞間。

4 實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全柜之外的物品，必須及時對手套進行消毒。

5 進入細胞培養(yǎng)間后關(guān)好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全柜的風(fēng)簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi)，更不能隨便使用，以免造成大規(guī)模污染。

6 細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡單轉(zhuǎn)動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。

7 實驗操作時生物安全柜的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區(qū)，以免造成不必要的污染。

8 瓶蓋應(yīng)當(dāng)?shù)狗旁谶h離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。

9 不要從敞開的容器口上方經(jīng)過，以避免衣服上掉落不明物體對細胞的污染。

10 實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底。一旦發(fā)現(xiàn)接觸了非潔凈或者無法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應(yīng)及時收拾，保持實驗室清潔整齊，最后用75%酒精清潔臺面。

防止細胞交叉污染

1 在進行多種細胞培養(yǎng)操作時，所用器具要嚴格區(qū)分，最好作上標(biāo)記便于辨別。按順序進行操作，一次只處理一種細胞，多種細胞多種操作一起進行時易發(fā)生t昆亂。

2 在進行換液或傳代操作時，粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口，以免把細胞帶到培養(yǎng)基中污染其他細胞。
3 所有細胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，必須及時保種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇細胞，繼續(xù)培養(yǎng)。

上海通蔚生物嚴格按照說明書的操作進行，細胞系所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理?？蓮臉?biāo)本收集、保存、預(yù)試驗、實驗、數(shù)據(jù)分析等全實驗過程提供完整的技術(shù)指導(dǎo)。